技術(shù)原理
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic
Repeats）是最新出現(xiàn)的一種由sgRNA指導(dǎo)Cas核酸酶對靶向基因進(jìn)行特定DNA修飾的技術(shù)。在這一系統(tǒng)中，sgRNA引導(dǎo)序列靶定位點(diǎn)剪切雙鏈DNA達(dá)到對基因組DNA 進(jìn)行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統(tǒng)能夠?qū)π∈蠡蚪M特定基因位點(diǎn)進(jìn)行精確編輯，目前瑞思元已經(jīng)成功將此技術(shù)應(yīng)用于小鼠基因敲除/敲入模型制備，以及條件性敲除（Loxp系統(tǒng)）模型制備。
目前瑞思元采取優(yōu)化過的野生型Cas9和雙切口Cas9n（Optimized Cas9 System,OCAS and OCASn）。采用優(yōu)化過的雙切口Cas9n(OCASn)可以將脫靶效應(yīng)降到最低。
H11位點(diǎn)定點(diǎn)過表達(dá)
H11位點(diǎn)（也叫Hipp11）位于小鼠第11號染色體，是 Eif4enif1與Drg1 這兩個(gè)基因之間的一個(gè)位點(diǎn)，由于H11位點(diǎn)位于兩個(gè)基因之間，外源基因插入后對內(nèi)源基因表達(dá)的影響很小，同時(shí)H11位點(diǎn)所在的Eif4enif1與Drg1這兩個(gè)基因的側(cè)翼序列區(qū)域具有廣泛的空間和時(shí)間EST表達(dá)模式，能夠使整合在此的外源基因受指定啟動(dòng)子的驅(qū)動(dòng)而穩(wěn)定表達(dá)。該位點(diǎn)的純合敲入小鼠可正常發(fā)育和繁殖。
利用CRISPR/cas9系統(tǒng)可以在H11位點(diǎn)構(gòu)建條件性基因過表達(dá)小鼠模型，即廣泛型強(qiáng)啟動(dòng)子pCAG與外源目的基因cDNA之間用loxP-stop-loxP結(jié)構(gòu)隔開，只有與組織特異性Cre工具鼠交配后，才會(huì)在特異細(xì)胞或組織中表達(dá)目的基因。
運(yùn)用
用于人類基因功能、蛋白功能的過表達(dá)研究
技術(shù)優(yōu)勢
研發(fā)周期：4-6個(gè)月；
按設(shè)計(jì)精準(zhǔn)插入；
基本保證過表達(dá)；
遺傳穩(wěn)定性高；
無需篩選，直接用于分析
制備流程
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